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这些注意事项对密理博超滤管的使用很重要

时间:2019-06-22 浏览次数:237

   密理博超滤管可用于生物样品纯化、蛋白质浓缩、脱盐和缓冲液更换,垂直结构的膜减少了浓差极化,快速离心并可直接吸取回收样本,浓缩倍数高达80-100倍,是样本处理的得力助手。密理博超滤管备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用。

  密理博超滤管的应用:
  1、蛋白质样品浓缩、脱盐及缓冲液置换。
  2、样品中去垢剂的去除;双向电泳样品的制备。
  3、未结合标志物的去除。
  4、尿液的浓缩。
  5、核算样品浓缩及脱盐。
  6、法医鉴定分析样品的预处理。
  7、纯化血清多肽做生物标志物;抗体的快速浓缩。
 
  密理博超滤管的使用注意事项:
  1、新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
  2、选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。
  3、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer,再浓缩至1ml左右,连续三次,zui后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
  4、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤。不同离心机的转速rpm换算成g之后,有所不同。离心机的加速度调至zui低档,减小对膜的压力。注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
  5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer,再浓缩至1ml左右,连续三次,zui后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
  6、当浓缩到剩下1ml时,取50ul缓冲溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要判断是否漏管,用5mgml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测,继续加入剩下的蛋白液浓缩,直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液,直到蛋白不发生沉淀为止。
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